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技術(shù)文章
想知道如何儲存酵母感受態(tài)細胞的方法就看看這些吧
  酵母,如釀酒酵母、裂殖酵母和畢赤酵母,通常用于生物學(xué)實驗研究。酵母是易于培養(yǎng)的單細胞真核生物,他們的基因和蛋白質(zhì)與哺乳動物具有很好的相似性,所以是好的生物模型。
 
  酵母細胞用于研究基因功能,蛋白質(zhì)相互作用,細胞通路等,也是大規(guī)模異源蛋白表達和小分子生產(chǎn)的宿主,在發(fā)酵,釀造和制藥行業(yè)等起著*的作用。涉及酵母的常見的實驗有酵母雙/三雜交系統(tǒng),突變體篩選庫和同源重組,等等。
 
  關(guān)于冷凍保護劑
 
  甘油和二甲亞砜(DMSO)是常見的細胞可透過性冷凍保護劑,用于準備感受態(tài)細胞。它們穿透細胞,防止冰晶的形成,冰晶可能會在凍結(jié)過程中導(dǎo)致膜破裂。甘油和DMSO也有一定的缺點,他們可能會導(dǎo)致細胞毒性,特別是在解凍過程中。
 
  非細胞透過性的試劑如蔗糖和海藻糖等也可用于替代物。山梨糖醇鈣也是一個好的冷凍保護劑,尤其適用于電穿孔制備感受態(tài)細胞。
 
  酵母感受態(tài)細胞的儲存
 
  每次轉(zhuǎn)化時使用新鮮的感受態(tài)細胞是明智的,因為長時間儲存,轉(zhuǎn)化效率會降低,但這并不總是可行的。
 
  感受態(tài)細胞可以存儲在-80°C長達一年,沒有轉(zhuǎn)化潛能的損失。然而,瞬間凍結(jié)在液氮或-80°C冰箱是不建議的。感受態(tài)細胞需要在冷凍保護劑中,像哺乳動物細胞一樣緩慢地冷凍。
 
  1. 使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。
 
  2. 用紙片等將盒子里的細胞管隔開,分成多個小格子。
 
  3. 復(fù)蘇過程中,在37°C解凍細胞,轉(zhuǎn)化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑。
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