FerroOrange (Fe2+indicator) 亞鐵離子熒光探針

產品標簽

FeRhoNox-1；FerroOrange；Labile ferrous ion不穩(wěn)定鐵(II)離子；Fe2+熒光探針；Ferroptosis鐵死亡；C11 BODIPY 581/591脂質過氧化探針；

產品信息

產品描述

FerroOrange是一種特異性檢測不穩(wěn)定的鐵(II)離子（Fe2+）的熒光探針，定位在內質網（ER）。一旦與Fe2+反應后，不可逆的生成一種橙色熒光產物（Absmax=542nm，FLmax=572nm，圖1. FerroOrange的光譜特征）。鐵（III）離子（Fe3+）或其它除鐵離子以外的二價金屬離子都不會使其熒光增強（見圖2. FerroOrange的反應特異性）。FerroOrange也不會與鐵蛋白和其它物質中的螯合鐵反應。FerroOrange具強細胞膜滲透性和低細胞毒性（見附圖3. FerroOrange的細胞毒性測定），非常適用于活細胞成像。

圖1. FerroOrange的光譜特征。FerroOrange在0.05M HEPES buffer, pH 7.4內的吸收光譜（左）和熒光光譜。吸收波長在542nm，熒光光譜在572nm。一旦與Fe2+反應，熒光強度顯著增加。

圖2. FerroOrange的反應特異性。FerroOrange與各種金屬離子（左），活性氧或還原劑（右）的反應性。僅當與Fe2+反應，FerroOrange呈強熒光。

保存與運輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1. FerroOrange主要定位在內質網（見附圖4），但也可能檢測細胞質池內的Fe2+，目前針對這一點未做明確評估。

2. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明

1. 需要自行準備的材料

1.1 細胞培養(yǎng)級DMSO（比如：MS4601A-100ML）

1.2 合適的清洗和觀察緩沖液（比如：PBS, pH 7.4；HBSS；無血清培養(yǎng)基等）。不要含酚紅。

2. 探針準備

2.1 從冰箱取出FerroOrange，置于室溫至少30min，將其置于微量離心機內低速離心。將瓶內的粉末離心到管底后，再開蓋。

2.2 往一管FerroOrange（24μg）內加入35μl高質量DMSO，用槍反復吹吸5次或以上，使其wan全溶解即得到1mMFerroOrange儲存液。若單次不能用完儲存液，請根據單次用量分裝，置于-20℃避光保存，一個月內使用。

2.3 于正式實驗前，用中性緩沖液或細胞培養(yǎng)基來稀釋1mM FerroOrange儲存液到所需工作濃度（比如：1μM），工作液需現配現用，盡快用完。【注意：酸性溶液會氧化FerroOrange，嚴重影響探針的效率】。

3. 染色步驟

3.1于熒光培養(yǎng)皿中接種細胞，于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育過夜。

3.2 染色步驟

4. 熒光檢測

對于熒光顯微鏡：通用的G激發(fā)濾片比如Cy3檢測用的濾片。

對于激光顯微鏡和流式細胞儀：532nm，514nm或561nm激光器用于激發(fā)。實在沒有，亦可用488nm激光器。發(fā)射波長為572nm。

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附錄 FerroOrange的細胞毒性

圖3.各種濃度FerroOrange對HepG2細胞的代謝活性。不同濃度的FerroOrange（以1% DMSO作為共溶劑）加入細胞內，培養(yǎng)24h后，用MTT法測定代謝活性。（n=3）

附錄FerroOrange的胞內定位

圖4.FerroOrange的胞內定位。將FerroOrange（紅色）, ER Tracker（綠色）和Hoechist 3342（藍色）加載進入HT-1080細胞并成像觀察。FerroOrange主要定位在內質網。Bar：10 μm。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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